乐伐替尼(lenvatinib)、乐卫玛(lenvima)对NK细胞浸润的影响-

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所属分类:疗效
摘要

为了研究乐伐替尼(乐卫玛)对NK细胞浸润的影响,我们首先使用抗小鼠NK1.1抗体(克隆PK136)进行免疫组化分析,在福尔马林固定肿瘤组织中检查NK细胞。

  为了研究乐伐替尼(lenvatinib)(乐卫玛(lenvima))对NK细胞浸润的影响,我们首先使用抗小鼠NK1.1抗体(克隆PK136)进行免疫组化分析,在福尔马林固定肿瘤组织中检查NK细胞。经乐伐替尼(lenvatinib)(乐卫玛(lenvima))处置的肿瘤组织中NK1.1+细胞的阳转率比经vatinib处置的肿瘤组织高约6倍。其次,我们使用pe标记的抗小鼠NK1.1抗体(克隆PK136)通过流式细胞术分析从载体或乐伐替尼(lenvatinib)(乐卫玛(lenvima))医治肿瘤的单细胞悬浮液中检查NK细胞的频率。乐伐替尼(lenvatinib)(乐卫玛(lenvima))医治导致肿瘤组织中NK细胞数量比载体医治延长约3倍。为了进一步证实这些发现,我们通过qRT-PCR检查了载体或乐伐替尼(lenvatinib)(乐卫玛(lenvima))医治的肿瘤组织中NK1.1的mRNA表达。qRT-PCR结果显示乐伐替尼(lenvatinib)(乐卫玛(lenvima))处置的肿瘤组织中NK1.1mRNA的表达明显高于车辆处置的肿瘤组织。在小鼠肾癌模型中也观察到了一致的结果。NK细胞是抗癌先天免疫反应的重要组成部分。提示促进NK细胞向肿瘤浸润可能是乐伐替尼(lenvatinib)(乐卫玛(lenvima))发挥抗癌作用的重要机制。

  NK细胞的降低会减弱乐伐替尼(lenvatinib)(乐卫玛(lenvima))诱导的肿瘤生长抑制作用

  如果乐伐替尼(lenvatinib)(乐卫玛(lenvima))诱导的NK细胞肿瘤浸润在抗癌免疫应答中起主导作用,那么NK细胞的清除应能减弱乐伐替尼(lenvatinib)(乐卫玛(lenvima))对肿瘤生长的抑制作用。为了验证这一假设,采用NK细胞缺失抗体(克隆PK136)预处置B16-F10移植的C57BL/6N小鼠,然后采用乐伐替尼(lenvatinib)(乐卫玛(lenvima))医治。在医治过程中不断检查血液中NK细胞。在处置过程中,小鼠体内的NK细胞几乎完全被去除。医治结束时检查到NK细胞浸润肿瘤。注射NK细胞耗竭抗体后小鼠肿瘤组织中几乎未检查到NK细胞。更重要的是,我们发现NK细胞的降低显著减少了乐伐替尼(lenvatinib)(乐卫玛(lenvima))诱导的肿瘤生长抑制。这些数据提示NK细胞可能在乐伐替尼(lenvatinib)(乐卫玛(lenvima))介导的抗癌作用中发挥重要作用。

  NK细胞耗竭抗体医治是否干扰乐伐替尼(lenvatinib)(乐卫玛(lenvima))受体酪氨酸激酶抑制活性?为了回答这个问题,我们进行了westernblot分析来检查下游讯号ERK和受体酪氨酸激酶磷酸化(phosphylated,Phospho-)Erk1/2。用溶剂对照、乐伐替尼(lenvatinib)(乐卫玛(lenvima))(1000nM、300nM、100nM)或乐伐替尼(lenvatinib)(乐卫玛(lenvima))加NK细胞灭活抗体(PK136,100磅g/mL)处置B16-F10细胞4小时。体内NK细胞灭活抗体的剂量为200磅/只。100mol/l的浓度应高于耗尽抗体的血浆浓度。在1000nM的剂量下,乐伐替尼(lenvatinib)(乐卫玛(lenvima))显著抑制ERK的磷酸化,NK细胞耗竭抗体并未减弱乐伐替尼(lenvatinib)(乐卫玛(lenvima))的抑制作用。因此,NK细胞耗竭抗体医治并不会干扰乐伐替尼(lenvatinib)(乐卫玛(lenvima))受体酪氨酸激酶抑制活性。这些数据进一步证明NK细胞在乐伐替尼(lenvatinib)(乐卫玛(lenvima))介导的抗癌作用中发挥重要作用。

  乐伐替尼(lenvatinib)(乐卫玛(lenvima))增强肿瘤NK细胞浸润相关粘附分子和趋化因子的表达

  由于乐伐替尼(lenvatinib)(乐卫玛(lenvima))医治延长了NK细胞聚集到肿瘤部位,NK细胞浸润可能延长。这些过程涉及一系列复杂的(系统自动过滤词),首先是NK细胞与内皮细胞的黏附,然后是调控NK细胞向肿瘤组织[14]外渗的趋化因子和趋化因子受体的互相作用。在包括NK细胞在内的大部分外周淋巴细胞中发现了整合素(Integrin),即(cyp)。整合素(x4-7)与包括VCAM-1(CD106)在内的配体结合在肿瘤血管内皮细胞上,在淋巴细胞粘附和血液淋巴细胞定向迁移到肿瘤外组织中发挥重要作用。为探讨NK细胞向肿瘤部位浸润延长的机制,我们检查了这些粘附分子在肿瘤血管内皮细胞和肿瘤浸润NK细胞中的表达。我们的数据显示,在肿瘤浸润的NK细胞中,整合素(cyp4,sig)和VCAM-1在肿瘤血管内皮细胞表面的表达显著上升。为了进一步研究乐伐替尼(lenvatinib)(乐卫玛(lenvima))医治对肿瘤中趋化因子表达的影响,我们对肿瘤组织进行了趋化因子阵列分析。该分析显示,与药品医治的肿瘤相比,乐伐替尼(lenvatinib)(乐卫玛(lenvima))医治的肿瘤中趋化因子CXCL9和CXCL10的表达显著上调。这些数据提示肿瘤部位NK细胞浸润延长可能是由于乐伐替尼(lenvatinib)(乐卫玛(lenvima))医治导致粘附分子和趋化因子表达延长所致。

  阻断NK趋化作用可减弱乐伐替尼(lenvatinib)(乐卫玛(lenvima))医治引发起的NK细胞浸润和肿瘤生长抑制

  之前的研究表明,CXCL9和CXCL10与NK细胞外周趋化有关,它们与NK细胞表面表达的受体CXCR3互相作用。为了进一步确认这两种趋化因子在本研究中的作用,我们首先通过流式细胞术分析检查了肿瘤浸润NK细胞表面CXCR3的表达。我们的数据显示,超过50%的肿瘤浸润NK细胞是cxcr3阳性,尽管在对照剂和乐伐替尼(lenvatinib)(乐卫玛(lenvima))医治组之间没有显著差异(数据未显示)。这个结果与之前报告的结果一致。为了确定CXCL9和CXCL10是否对乐伐替尼(lenvatinib)(乐卫玛(lenvima))介导的肿瘤消退至关重要,我们在B16-F10荷瘤C57BL/6N小鼠中使用抗小鼠CXCR3阻断抗体(CXCR3-173)联合乐伐替尼(lenvatinib)(乐卫玛(lenvima))医治。CXCR3阻断显著减弱乐伐替尼(lenvatinib)(乐卫玛(lenvima))介导的肿瘤生长抑制并延长肿瘤部位NK细胞浸润。总之,这些结果明白地表明,CXCL9和cxcl10依赖的NK细胞募集到肿瘤部位对乐伐替尼(lenvatinib)(乐卫玛(lenvima))介导的抗癌免疫反应至关重要。

  乐伐替尼(lenvatinib)(乐卫玛(lenvima))促进肿瘤浸润NK细胞的活化

  我们已经证明NK细胞在乐伐替尼(lenvatinib)(乐卫玛(lenvima))的抗癌作用中发挥重要作用,并机制连接乐伐替尼(lenvatinib)(乐卫玛(lenvima))与NK细胞浸润肿瘤。乐伐替尼(lenvatinib)(乐卫玛(lenvima))医治是否能增强肿瘤浸润NK细胞的活化和细胞毒性?自然细胞毒性受体(NCR)通过NKp46、NKp44和NKG2-D介导的细胞毒性和cd16介导的抗体依赖性细胞毒性(ADCC)是两种主要机制,NK细胞通过与靶细胞互相作用释放细胞毒性细胞因子。

  为了证实这些机制,我们首先通过流式细胞术分析乐伐替尼(lenvatinib)(乐卫玛(lenvima))医治对CD16、NKp46和NKG2-D对肿瘤浸润NK细胞表达的影响。结果显示,乐伐替尼(lenvatinib)(乐卫玛(lenvima))医治显著提高了肿瘤浸润NK细胞表面CD16和NKp46的表达。虽然乐伐替尼(lenvatinib)(乐卫玛(lenvima))医治与对照剂医治相比延长了肿瘤浸润NK细胞上NKG2-D的表达,但差异无统计学意义(数据未显示)。为了进一步证实乐伐替尼(lenvatinib)(乐卫玛(lenvima))医治是否能提高NK细胞的细胞毒性,我们将C57BL/6N小鼠肿瘤细胞中区别取NK细胞,区别接受vehicle或乐伐替尼(lenvatinib)(乐卫玛(lenvima))(10毫克/kg)医治,并与B16-F10细胞按E:T比值=5:1共培养。real-timecellassay(RTCA)检查NK细胞对B16-F10细胞的直接细胞毒性。70h时相应的定量分析结果显示,经乐伐替尼(lenvatinib)(乐卫玛(lenvima))处置的小鼠肿瘤NK细胞的细胞毒性强于经车药处置的小鼠肿瘤NK细胞。提示乐伐替尼(lenvatinib)(乐卫玛(lenvima))医治可促进肿瘤浸润NK细胞的活化和细胞毒性。乐伐替尼(lenvatinib)(乐卫玛(lenvima))能够咨询[药道网],详情请扫码咨询:

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